百螢 Cell Meter 活細胞Caspase 1結合檢測試劑盒 綠色熒光

一、百螢cell meter 活細胞caspase 1結合檢測試劑盒 綠色熒光概述
我們的cell meter 活細胞半胱天冬酶活性檢測試劑盒基于半胱天冬酶的熒光抑制劑。這些抑制劑具有細胞滲透性和非細胞毒性。一旦進入細胞，半胱天冬酶與活性半胱天冬酶共價結合。caspase-1主要參與促炎細胞因子的細胞凋亡過程。已經(jīng)證明胱天蛋白酶1對肽序列tyr-val-ala-asp（yvad）具有底物選擇性。該試劑盒使用fam-yvad-fmk作為半胱天冬酶1活性的熒光指示劑。 fam-yvad-fmk在凋亡細胞中不可逆地結合活化的半胱天冬酶1。一旦與半胱天冬酶1結合，熒光試劑保留在細胞內(nèi)。結合抑制胱天蛋白酶1但不會阻止細胞凋亡的進行。
有多種參數(shù)可用于監(jiān)測細胞凋亡。這種cell meter 活細胞半胱天冬酶1活性檢測試劑盒旨在通過測量活細胞中的caspase 1活化來檢測細胞凋亡。它用于定量凋亡細胞中活化的半胱天冬酶1活性，或用于篩選半胱天冬酶1抑制劑。綠色標記試劑fam-yvad-fmk允許通過熒光顯微鏡，流式細胞儀或熒光酶標儀直接檢測凋亡細胞中活化的半胱天冬酶1。該試劑盒為所有必需組分提供優(yōu)化的分析方案。
二、百螢cell meter 活細胞caspase 1結合檢測試劑盒 綠色熒光參數(shù)
ex(nm)
493
em(nm)
517
溶劑
water
存儲條件
在-15℃以下保存，避免光照
三、百螢cell meter 活細胞caspase 1結合檢測試劑盒 綠色熒光適用儀器
流式細胞儀
ex：
fl1通道
em:
fl1通道
儀器規(guī)格：
用于碘化丙啶的fl2通道
熒光顯微鏡
ex：
fitc通道
em：
fitc通道
通道：
黑色透明
熒光酶標儀
ex：
490nm
em：
525nm
cutoff:
515nm
通道：
黑色透明
四、百螢cell meter 活細胞caspase 1結合檢測試劑盒 綠色熒光實驗方案
分離細胞的檢測方案
概述
用密度為5×105到2×106個細胞/ ml的測試化合物制備細胞
將fam-yvad-fmk以1：150的比例加入到細胞溶液中
在室溫下孵育1小時
將細胞沉淀，用緩沖液或生長培養(yǎng)基洗滌并重懸細胞
在ex / em = 490 / 525nm處分析細胞
注：使用前將所有部件在室溫下解凍。
操作方法
1.根據(jù)您的特異性誘導方案，將細胞培養(yǎng)至適于細胞凋亡誘導的密度，但不**過2 x 106個細胞/ ml。同時，對于每種標記條件，以與誘導群體相同的密度培養(yǎng)非誘導的陰性對照細胞群。以下是一些誘導懸浮培養(yǎng)細胞凋亡的例子：
1）用2μg/ ml喜樹堿處理jurkat細胞3小時。
2）用1μm星形孢菌素處理jurkat細胞3小時。
3）用4μg/ ml喜樹堿處理hl-60細胞4小時。
4）用1μm星形孢菌素處理hl-60細胞4小時。
注意：應對每個細胞系進行單獨評估，以確定誘導細胞凋亡的細胞密度。
2.通過向fam-yvad-fmk（組分a）的小瓶中加入50μldmso制備150x fam-yvad-fmk dmso儲備溶液。
3.將150×fam-yvad-fmk dmso儲備溶液（來自步驟1）以1：150的比例添加到細胞溶液中，并將細胞在37℃，5％co 2培養(yǎng)箱中孵育1小時。
注1：對于fam-yvad-fmk標記，細胞可以濃縮至~5×10 6個細胞/ ml。 未使用的150x fam-yvad-fmk dmso儲備溶液應分為單次使用的等分試樣并儲存在-20°c。
注2：對于粘附細胞，用0.5mm edta輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在用fam-yvad-fmk孵育之前用含xue清的培養(yǎng)基洗滌細胞一次。
注3：適當?shù)姆跤龝r間取決于所用的細胞類型和細胞濃度。 優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
4.將細胞以約200g旋轉5分鐘，并用1ml洗滌緩沖液（組分b）洗滌細胞兩次。 將細胞重懸于所需量的洗滌緩沖液中。
注1：fam-yvad-fmk是熒光的，因此qing除任何未結合的試劑以xiao除背景非常重要。
注2：對于分離的細胞，應將細胞濃度調(diào)節(jié)至每個微量滴定板孔中2-5×10 5個細胞/100μl等分試樣，用于步驟6。
5.如果需要，用dna染色標記細胞（如用于死細胞的碘化丙錠，或用于細胞核染色的整個群體的hoechst）。
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